RASSF1A基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖凋亡、体内成瘤能力的影响观察

摘要：

目的 观察Ras相关区域家族1异构体A(RASSF1A)基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖、凋亡、体内成瘤能力的影响,并探讨其作用的可能机制.方法 取MCF-7细胞,分别感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A和空白载体慢病毒vector,记为oe-RASSF1A组和vector组.两组细胞继续培养72 h,采用qRT-PCR法检测两组细胞中的RASSF1A mRNA.两组细胞在培养24、48、72、96 h时,采用MTS法观察两组细胞增殖能力(以OD值表示细胞增殖能力).两组细胞继续培养72 h,采用流式细胞仪测算各细胞周期比例.两组细胞继续培养72 h,采用流式细胞仪测算细胞凋亡率.两组细胞继续培养72 h,取1×107个细胞重悬于100μL PBS中,分别注射入10只4周龄雌性裸鼠右侧腋下,常规饲养4周后处死,解剖瘤体并称重,以瘤体重表示体内成瘤能力.两组细胞继续培养72 h,采用Western Blotting法检测两组细胞中的RASSF1A、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(pPI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(pAKT)蛋白.结果 oe-RASSF1A组细胞中RASSF1A mRNA相对表达量为13.25±3.20,vector组为1.00±0.03,两组相比,P<0.05.oe-RASSF1A组细胞在培养24、48、72、96 h时的OD值分别为0.36±0.02、0.53±0.06、0.74±0.13、0.91±0.07,vector组分别为0.35±0.03、0.62±0.14、0.95±0.08、1.34±0.21,在培养72、96 h时两组的OD值相比,P均<0.05.oe-RASSF1A组细胞处于G0/G1期、S期、G2/M期的比例分别为60.02％ ±3.21％、18.30％ ±2.31％、22.11％ ±1.03％,vector组分别为63.67％ ±4.16％、21.04％ ±2.65％、15.32％ ±2.52％,oe-RASSF1A组细胞处于G2/M期的比例与vector组相比,P<0.05.oe-RASSF1A组细胞凋亡率为24.38％ ±5.80％,vector组为4.25％ ±0.92％,两组相比,P<0.05.注射oe-RASSF1A组细胞的裸鼠成瘤的瘤体重为(63.29±14.03)mg,注射vector组细胞的裸鼠成瘤的瘤体重为(104.58±17.52)mg,两组相比,P<0.05.oe-RASSF1A组细胞RASSF1A、PI3K、pPI3K、AKT、pAKT蛋白相对表达量分别为8.67±1.32、0.86±0.21、0.26±0.15、0.91±0.11、0.30±0.07,vector组分别为1.05±0.04、1.00±0.00、1.01±0.01、1.04±0.04、1.00±0.00,两组细胞RASSF1A、pPI3K、pAKT蛋白相对表达量相比,P均<0.05.结论 感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A的MCF-7细胞RASSF1A mRNA升高;过表达RASSF1A可抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞周期阻滞在G2/M期、促进细胞凋亡、抑制细胞体内成瘤能力,其机制可能与RASSF1A抑制PI3K/AKT信号通路有关.

关键词：Ras相关区域家族1异构体A基因、细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、PI3K/AKT信号通路、乳腺肿瘤、乳腺癌

所属期刊栏目：59

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：四川省科技计划项目2017YFS306

在线出版日期：2020-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：17-21