深静脉血栓形成患者外周血miR-374a-5p、IL-10水平变化及其调控关系

摘要：

目的 观察深静脉血栓形成(DVT) 患者外周血微小RNA-374a-5p(miR-374a-5p) 、白细胞介素10(IL-10) 水平变化, 并分析二者在DVT发病中的关系.方法 收集DVT患者(DVT组) 和健康对照(健康对照组) 各30例, 抽取受试者空腹静脉血, 分离血清及单个核细胞(PBMC) , ELISA法检测血清IL-10蛋白, q PCR法检测PBMC中的miR-374a-5p.通过对差异基因的生物信息学分析, 用Target Scan 7.1程序预测miR-374a-5p与IL-10 mRNA 3'非翻译区(3'UTR) 是否存在结合位点;将293T细胞分为干预组和对照组, 干预组同时转染空白对照NC与野生型或突变型IL-10 3'UTR荧光素酶报告基因pmir GLO载体, 采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶报告基因活性.将He La细胞分为3组, 过表达组、抑表达组利用Lipofectamine 2000转染miR-374a-5p过表达及抑表达基因序列, 空白对照组转染阴性对照引物;转染24 h后收集细胞, q PCR检测各组细胞IL-10 mRNA水平, ELISA检测各组培养上清IL-10蛋白水平.结果 与健康对照组比较, DVT组血清IL-10蛋白水平降低而PBMC中miR-374a-5p表达升高(P均<0.05) .Target Scan 7.1程序预测显示, miR-374a-5p与IL-10 mRNA 3'UTR之间具有潜在碱基互补结合位点;双荧光素酶报告基因系统检测显示, 与对照组比较, 干预组能降低野生型IL-10 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性, 但对突变型IL-10 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性无明显影响(P> 0.05) .与空白对照组比较, 过表达组He La细胞IL-10 mRNA表达及上清液IL-10蛋白水平均降低(P均<0.05) , 抑表达组He La细胞IL-10 mRNA表达及上清液IL-10蛋白水平均升高(P均<0.05) .结论 DVT患者血清IL-10蛋白水平降低而PBMC中miR-374a-5p表达升高, miR-374a-5p通过碱基互补结合IL-10 mRNA 3'UTR抑制IL-10表达, 进而介导的炎症反应参与DVT形成, 靶向miR-374a-5p调控细胞因子表达可能成为DVT治疗的有效靶点与途径.

关键词：深静脉血栓、白细胞介素10、微小核糖核酸374a-5p、表观遗传、炎症反应

所属期刊栏目：59

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金资助项目81673981, 81873337;中国博士后特别资助项目2017T100513;山东省自然科学基金项目ZR2018PH042, ZR2013HQ038;山东省重点研发项目2017GSF19118, 2017G006018;山东省中医药科技发展计划2015-112, 2013-217

在线出版日期：2019-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：13-16