促红细胞生成素对高氧诱导人肺泡上皮细胞A549凋亡的预防作用及其机制

摘要：

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对高氧诱导的人肺泡上皮细胞A549凋亡的预防作用,并探讨其机制.方法 将体外培养的A549细胞分为观察1、2、3、4组及模型对照组、空白对照组.观察1、2、3、4组细胞分别加入10、20、50、100 IU/mL的EPO预处理24h,然后置于氧浓度＞90％的高氧培养箱内培养24 h.模型对照组细胞直接置于氧浓度＞90％的高氧培养箱内培养24h.空白对照组细胞常规条件下培养24 h.采用CCK-8法观察各组细胞增殖情况(以OD450表示),采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,采用扫描电镜观察各组线粒体形态;采用免疫组化SP法检测观察4组、模型对照组和空白对照组神经萎缩症蛋白1(OPA1)蛋白[结果以IOD值表示],采用四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)法检测上述三组线粒体膜电位(结果用红绿荧光强度比值表示).结果 ①观察1、2、3、4组及模型对照组、空白对照组OD450分别为0.21 ±0.03、0.28 ±0.02、0.32 ±0.03、0.34±0.04和0.16 ±0.04、0.37 ±0.06,模型对照组0D450低于空白对照组,观察1、2、3、4组OD450高于模型对照组(P均＜0.05),观察1、2组OD450低于空白对照组(P均＜0.05).②观察1、2、3、4组及模型对照组、空白对照组细胞凋亡率分别为3.70±0.66、2.31 ±0.54、1.08 ±0.49、1.13 ±0.51和5.24±0.93、0.95 ±0.37,模型对照组细胞凋亡率高于空白对照组,观察1、2、3、4组细胞凋亡率低于模型对照组,观察1、2组细胞凋亡率低于空白对照组(P均＜0.05).③倒置相差显微镜下,模型对照组细胞受损明显,变为圆形或椭圆形,细胞间空隙加大,活细胞数量明显降低,悬浮细胞明显增多;观察1、2、3、4组随EPO浓度增加,细胞损伤状况与模型对照组相比明显改善;观察3、4组细胞形态与空白对照组相似.④透射电子显微镜下,模型对照组细胞大量线粒体肿胀或破裂,线粒体的数量增多,并可伴线粒体嵴数减少或消失、染色质浓缩、细胞核裂解为碎块等细胞凋亡特征.观察1、2、3、4组线粒体断裂情况有所恢复,观察3、4组细胞线粒体断裂情况与空白对照组相似.⑤观察4组、模型对照组、空白对照组OPA1的IOD值分别为23.01±2.01、7.53 ±1.16、38.25±6.67.观察4组OPA1的IOD值高于空白对照组,低于模型对照组(P均＜0.05).⑥观察4组、模型对照组、空白对照组红绿荧光强度比值分别为1.73 ±0.06、1.32 ±0.07、1.96±0.84.观察4组红绿荧光强度比值低于空白对照组,高于模型对照组(P均＜0.05).结论 EPO可以预防高氧诱导的A549细胞凋亡,其机制可能是EPO预处理可以增加OPA1表达,稳定线粒体膜电位.

关键词：促红细胞生成素、肺上皮细胞、高浓度氧、肺损伤、细胞凋亡、神经萎缩症蛋白1

所属期刊栏目：58

分类号：R563(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81571480;西南医科大学科研课题基金资助项目0930-00030734

在线出版日期：2018-07-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：26-29