DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及乙醛脱氢酶1、Notch信号通路受体和配体表达的影响

摘要：

目的 观察γ-分泌酶抑制剂(GSIs)DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及结直肠癌肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)、Notch信号通路受体Notch4、Notch信号通路配体DLL1表达的影响.方法 体外培养HT-29细胞,取对数生长期细胞用于实验.分别以0、5、10、20、40、80 μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24、48、72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT比色法检测细胞增殖能力(以OD值表示).分别以0、20、40 μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24 h后,采用RT-PCR法检测细胞中的ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA,分别采用Western blotting法和免疫组化法检测ALDH1、Notch4、DLL1蛋白.分析HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA及蛋白表达的相关性.结果 DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用呈一定剂量、时间依赖性,40、80 μmol/L浓度组培养48、72 h时细胞增殖能力低于培养24 h时(P均<0.05).DAPT处理后的细胞形态出现典型凋亡状态改变.20、40 μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA相对表达量低于0 μmol/L组(P均<0.05).0、20、40 μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05).免疫组化染色图像分析结果示,0、20、40 μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白表达OD值依次降低(P均<0.05).HT-29细胞中ALDH1、DLL1 mRNA表达与Notch4 mRNA表达均呈正相关关系(r分别为0.997、0.998,P均<0.05).HT-29细胞中ALDH1、DLL1蛋白表达与Notch4蛋白表达均呈正相关关系(r分别为0.998、0.999,P均<0.05).结论 DAPT作用后,细胞增殖受到抑制,细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA和蛋白表达下调;DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用可能与降低肿瘤干细胞特性、下调Notch信号通路受体与配体表达实现的.

关键词：结肠癌、HT-29细胞、γ-分泌酶抑制剂、(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯、肿瘤干细胞、乙醛脱氢酶1、Notch信号通路、Notch4、DLL1

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分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：贵州省科技计划项目黔科合SY字2013-3006;贵州省科学技术基金资助项目黔科合SY字2010-2172

在线出版日期：2017-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-8