小G蛋白Rab5对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾通道的影响

摘要：

目的 探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响.方法 将对数生长期HEK293细胞,随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组.采用脂质体转染法进行转染,Control组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和对照质粒pcDNA3.1,Rab5WT组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和Rab5WT质粒,Rab5CA组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和Rab5CA质粒,Rab5DN组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和Rab5DN质粒,每组两种质粒总量为4μg,按质量比1∶1共转染至3.5 mm培养皿中.转染72 h、荧光显微镜下观察转染效率在70％以上时,采用膜片钳、Western blotting法和流式细胞术观察Rab5对HEK293细胞BKCa的作用.结果 与Control组比较,Rab5WT组、Rab5CA组BKCa全细胞电流密度明显增加,而Rab5DN组明显降低;Rab5WT组、Rab5CA组BKCa膜蛋白的相对表达量明显升高,而Rab5DN组明显降低(P均＜0.05);Rab5WT组、Rab5CA组Flag+/GFP+明显增加,而Rab5DN组明显降低(P均＜0.05).结论 Rab5能够明显增加表达在HEK293细胞上的BKCa电流及细胞膜上的表达,并可促进BKCa向质膜的转运过程.

关键词：小G蛋白家族、大电导钙激活钾通道、蛋白转运、基因转染

所属期刊栏目：57

分类号：R331.3+6(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31300948

在线出版日期：2018-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：21-24,后插1