低氘水对人肺癌细胞 A549增殖和分化的影响及机制

摘要：

目的：研究低氘水（ DDW）对人肺癌A549细胞增殖和分化的影响，并探讨其作用机制。方法取A549细胞分为观察组和对照组，分别用氘含量为50 ppm的DDW配制的培养基、正常水配制的培养基培养30 d，倒置显微镜下观察两组细胞形态，用CCK-8法测定48 h内细胞生长情况。观察组和对照组细胞先分别在无血清的DDW培养基和正常水培养基中培养48 h使细胞生长同步化，然后分别加入含10％血清的DDW培养基和正常水培养基继续培养，用碘化丙啶染色和流式细胞分析仪测定两组36、48 h时处于细胞周期G1、S和G2／M期的细胞比例；取两组细胞裂解液，抽提细胞总蛋白，Western blot法检测丝裂原活化的细胞外信号调节激酶（ MEK1）、表皮生长因子受体（ EGFR）表达，MEK1第217和第298位丝氨酸磷酸化水平，EGFR第1016和第1110位酪氨酸磷酸化水平；比较两组肺泡Ⅰ型上皮细胞特异性蛋白标志物AQP5、T1a和肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性蛋白标志物SPB、SPC1、SPC2、CFTR的表达。结果对照组细胞呈立方形、细胞间紧密接触和堆积生长，观察组细胞呈纺锤形、细胞伸长、细胞间接触较松散。观察组36、48 h时的OD值均较对照组降低（P均＜0．05）。血清饥饿后再刺激36 h，观察组处于G1期的细胞比例为71．75％，高于对照组的57．01％；观察组处于S期的细胞比例为22．43％，低于对照组的35．88％（ P均＜0．01）；48 h时两组细胞周期比例比较差异无统计学意义。两组MEK1、EGFR表达及EGFR第1016位和第1110位酪氨酸磷酸化水平比较差异无统计学意义，观察组MEK1第217位和第298位丝氨酸磷酸化的水平降低（ P均＜0．01）。观察组SPC2水平较对照组升高（P＜0．01）。结论 A549细胞用DDW长期培养，可显著抑制其细胞增殖和分化，其机制可能与降低MEK1的磷酸化水平、阻滞细胞周期G1／S期转变以及诱导A549细胞由Ⅱ型肺泡上皮细胞向Ⅰ型肺泡上皮细胞转化、提高细胞分化程度有关。

关键词：肺癌、低氘水、细胞周期、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶、细胞分化

所属期刊栏目：57

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81272478；教育部重点实验室开放课题AF4150013。

在线出版日期：2017-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-4