10.3969/j.issn.1002-266X.2016.47.006
转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞中HCN4蛋白表达、If及对心肌细胞搏动频率的影响观察
目的:观察转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞HCN4蛋白表达、超极化激活内向离子电流(If)及对心肌细胞搏动频率的影响。方法取新生SD大鼠,断头处死后取心脏,分离培养成纤维细胞及心肌细胞。构建人TBX18基因的腺病毒载体Ad-GFP-TBX18,包装并纯化病毒滴度至1×1010 TU/mL。取传代2~5代时对数生长期新生大鼠成纤维细胞分为A、B、C组,培养24 h后A、B组分别转染Ad-GFP-TBX18、腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP(阴性对照),C组不做任何处理。采用RT-PCR法检测各组细胞TBX18 mRNA。采用Western blotting法检测各组超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)蛋白。采用电压钳记录各组细胞超极化激活内向离子电流(If)。将各组细胞与新生大鼠心肌细胞共培养,观察新生大鼠心肌细胞搏动频率。结果 A、B、C组TBX18 mRNA相对表达量分别为98.32±6.21、1.03±0.05、1.02±0.02。A组TBX18 mRNA相对表达量高于B、C组(P均<0.05);B、C 组TBX18 mRNA相对表达量差异无统计学意义。A、B、C组HCN4蛋白相对表达量分别为0.49±1.21、0.12±0.02、0.09±0.01。A组HCN4蛋白相对表达量高于B、C组(P均<0.05);B、C组HCN4蛋白相对表达量差异无统计学意义。A组约有30%的细胞可以检测到If,而B、C组中没有细胞检测到If。同一时点A组新生大鼠心肌细胞搏动频率高于B、C组(P均<0.05);B、C组新生大鼠心肌细胞搏动频率差异无统计学意义。结论转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞高表达HCN4蛋白,存在If电流,并能促进共培养新生大鼠心肌细胞的搏动。
TBX18基因、基因转染、成纤维细胞、心肌细胞、超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4、超极化激活内向离子电流、心脏起博、动物实验
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R54(心脏、血管(循环系)疾病)
国家自然科学基金面上项目81270249;国家自然科学基金面上项目81570306;湖北省科技支撑计划项目2013BCB013。
2017-01-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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