Mc l-1基因si RN A囊泡制备及其对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用观察

摘要：

目的：制备包载髓样细胞白血病1（Mcl-1）基因的小干扰RNA（siRNA）囊泡（Mcl-1基因siRNA囊泡），并观察其对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用。方法①Mcl-1基因siRNA囊泡制备及其功能鉴定：采用乙醇注入法制备空白囊泡，将其分别和FAM标记（荧光标记物，可在显微镜下被观察）的正常siRNA（FAM-siRNA）、Mcl-1基因siRNA溶液涡旋、静电复合，室温静置30 min，获得包载FAM-siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA囊泡。采用马尔文激光粒度仪测定空白囊泡、包载FAM-siRNA囊泡的平均粒径和zeta电位；采用超滤离心－荧光分光光度法测定包载FAM-siRNA囊泡的荧光强度并计算包封率；观察FAM-siRNA释放情况，计算FAM- siRNA释放率。取HepG2细胞分为A、B、C、D 组，培养24 h 时 C 组加入包载 FAM- siRNA 囊泡，D 组加入包载 FAM-siRNA 囊泡和 Lipo-fectamin转染试剂，B组加入游离FAM-siRNA，A组不做任何处理，继续培养6 h时观察各组细胞FAM- siRNA摄取情况。②转染Mcl-1基因siRNA囊泡对HepG2细胞的生长抑制作用观察：取HepG2细胞，分为1、2、3、4、5组，5×105／孔接种于6孔板，每组3个复孔。培养24 h时1、2、3、4组分别加入游离Mcl-1 siRNA、包载FAM- siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA ＋Lipofectamin转染试剂，5组不做任何处理。培养78 h时检测各组细胞Mcl-1蛋白。取HepG2细胞分为甲、乙、丙、丁组及对照组，培养24 h时甲、乙、丙、丁组分别加入终浓度为1、10、50、100、200 nmol／L的游离Mcl-1基因siRNA、包载FAM- siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA＋Li-pofectamin转染试剂，对照组不做任何处理。培养48 h时观察各组细胞生存情况，计算细胞存活率。结果空白囊泡、包载FAM- siRNA囊泡粒径、zeta电位相比，P均＜0．01。包载FAM- siRNA囊泡包封率82．3％±2．1％。培养1、3、6、12、24、36、48、72、96 h时FAM- siRNA囊泡的FAM-siRNA释放率分别为13．5％±2．8％、26．1％±1．6％、38．0％±2．9％、50．6％±2．3％、56．8％±2．9％、59．9％±2．3％、63．3％±2．0％、65．0％±2．7％、67．2％±2．9％。C、D组对FAM-siRNA摄取情况优于B组。1、2、3、4、5组细胞Mcl-1蛋白相对表达量分别102．0±4．9、103．8±8．3、25．2±3．7、29．4±6．4、96．1±5．8，3组Mcl-1蛋白相对表达量明显低于1、2、5组，P均＜0．01。当转染浓度为100 nmol／L时，丙、丁组细胞生存率均高于甲、乙组，P均＜0．01；丁组细胞生存率高于丙组，P＜0．01。结论成功制备Mcl-1基因siRNA囊泡。HepG2细胞中Mcl-1蛋白低表达。转染Mcl-1基因siRNA囊泡的HepG2细胞存在生长抑制。

关键词：髓样细胞白血病1、小干扰RN A、RN A干扰、囊泡、肝癌、细胞存活率

所属期刊栏目：56

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2016-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-8