10.3969/j.issn.1002-266X.2016.39.002
Mc l-1基因si RN A囊泡制备及其对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用观察
目的:制备包载髓样细胞白血病1(Mcl-1)基因的小干扰RNA(siRNA)囊泡(Mcl-1基因siRNA囊泡),并观察其对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用。方法①Mcl-1基因siRNA囊泡制备及其功能鉴定:采用乙醇注入法制备空白囊泡,将其分别和FAM标记(荧光标记物,可在显微镜下被观察)的正常siRNA(FAM-siRNA)、Mcl-1基因siRNA溶液涡旋、静电复合,室温静置30 min,获得包载FAM-siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA囊泡。采用马尔文激光粒度仪测定空白囊泡、包载FAM-siRNA囊泡的平均粒径和zeta电位;采用超滤离心-荧光分光光度法测定包载FAM-siRNA囊泡的荧光强度并计算包封率;观察FAM-siRNA释放情况,计算FAM- siRNA释放率。取HepG2细胞分为A、B、C、D 组,培养24 h 时 C 组加入包载 FAM- siRNA 囊泡,D 组加入包载 FAM-siRNA 囊泡和 Lipo-fectamin转染试剂,B组加入游离FAM-siRNA,A组不做任何处理,继续培养6 h时观察各组细胞FAM- siRNA摄取情况。②转染Mcl-1基因siRNA囊泡对HepG2细胞的生长抑制作用观察:取HepG2细胞,分为1、2、3、4、5组,5×105/孔接种于6孔板,每组3个复孔。培养24 h时1、2、3、4组分别加入游离Mcl-1 siRNA、包载FAM- siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA +Lipofectamin转染试剂,5组不做任何处理。培养78 h时检测各组细胞Mcl-1蛋白。取HepG2细胞分为甲、乙、丙、丁组及对照组,培养24 h时甲、乙、丙、丁组分别加入终浓度为1、10、50、100、200 nmol/L的游离Mcl-1基因siRNA、包载FAM- siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA囊泡、Mcl-1基因siRNA+Li-pofectamin转染试剂,对照组不做任何处理。培养48 h时观察各组细胞生存情况,计算细胞存活率。结果空白囊泡、包载FAM- siRNA囊泡粒径、zeta电位相比,P均<0.01。包载FAM- siRNA囊泡包封率82.3%±2.1%。培养1、3、6、12、24、36、48、72、96 h时FAM- siRNA囊泡的FAM-siRNA释放率分别为13.5%±2.8%、26.1%±1.6%、38.0%±2.9%、50.6%±2.3%、56.8%±2.9%、59.9%±2.3%、63.3%±2.0%、65.0%±2.7%、67.2%±2.9%。C、D组对FAM-siRNA摄取情况优于B组。1、2、3、4、5组细胞Mcl-1蛋白相对表达量分别102.0±4.9、103.8±8.3、25.2±3.7、29.4±6.4、96.1±5.8,3组Mcl-1蛋白相对表达量明显低于1、2、5组,P均<0.01。当转染浓度为100 nmol/L时,丙、丁组细胞生存率均高于甲、乙组,P均<0.01;丁组细胞生存率高于丙组,P<0.01。结论成功制备Mcl-1基因siRNA囊泡。HepG2细胞中Mcl-1蛋白低表达。转染Mcl-1基因siRNA囊泡的HepG2细胞存在生长抑制。
髓样细胞白血病1、小干扰RN A、RN A干扰、囊泡、肝癌、细胞存活率
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R734.2(肿瘤学)
2016-11-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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