10.3969/j.issn.1002-266X.2016.29.013
HSP70及 Ezrin 蛋白表达变化对人成骨肉瘤M G63细胞凋亡和增殖的影响
目的:分析人成骨肉瘤MG63细胞中热休克蛋白70( HSP70)、细胞骨架蛋白( Ezrin)的表达对该细胞凋亡和增殖的影响。方法首先在有双启动子的质粒载体pGFP-V-RS中构建能够表达HSP70和Ezrin蛋白shRNA的载体并重组质粒,将质粒转染入MG63细胞,分为联合表达组、单纯shRNA组、空白载体组,筛选稳定表达细胞培养增殖,采用RT-PCR及Western blotting法检测这两种蛋白基因表达情况与蛋白水平;Western blotting法检测凋亡相关蛋白,使用流式细胞术及噻唑蓝比色法分别检测第1、3、5、7天细胞凋亡及增殖率。结果联合表达组Ezrin mRNA及Ezrin蛋白合成量低于空白载体组和单纯shRNA组,HSP70 mRNA及HSP70蛋白合成量高于空白载体组和单纯shRNA组( P均<0.01),HSP70和Ezrin联合表达的MG63细胞构建成功。低表达Ezrin和高表达HSP70的载体质粒构建成功。联合表达组MG63细胞凋亡率(23.94%±0.48%)较空白载体组(10.96%±0.25%)高( P<0.01),增殖速度(308.67%±2.91%)较单纯shRNA组(394.80%±2.63%)慢(P<0.01);与空白载体组比较,单纯shRNA组、联合表达组第3、5、7天细胞增殖率降低,抑制率升高( P均<0.01)。与单纯shRNA组比较,联合表达组第3、5、7天细胞增殖率低,抑制率低(P均<0.01)。结论高表达的HSP70和低表达的Ezrin在促进骨肉瘤细胞凋亡的同时减缓其增长速度。
骨肉瘤细胞、热休克蛋白质70、Ezrin蛋白、shRNA
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R738.3(肿瘤学)
2016-08-29(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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