人 SND1基因慢病毒载体构建及稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌 SKOV3细胞株筛选

摘要：

目的：构建人SND1基因慢病毒载体，筛选稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株，为探讨SND1基因对卵巢癌的调控作用提供细胞系模型。方法采用PCR法从pCMV-FLAG-SND1质粒中扩增FLAG-SND1基因片段，连接到慢病毒载体表达质粒pLVX-IRES-Hyg中，获得重组慢病毒载体pLVX-FLAG-SND1。以pLVX-FLAG-SND1瞬时转染293T细胞48 h，采用Western blotting法检测SND1蛋白表达量。 pLVX-FLAG-SND1重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞，获得携带FLAG-SND1的重组慢病毒。以慢病毒感染SKOV3细胞48 h，在细胞培养基中加入1μg／mL潮霉素B，筛选稳定表达SND1蛋白的细胞株，采用Western blotting法检测该细胞株内SND1蛋白表达量。结果重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确。重组慢病毒载体在瞬时转染的293T细胞中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞（P＜0．01）。 SKOV3细胞经慢病毒感染、药物筛选后获得的稳定表达株中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞（ P＜0．01）。结论成功构建了SND1基因慢病毒载体pLVX-FLAG-SND1，并筛选出稳定表达SND1蛋白的SKOV3细胞株，为进一步明确卵巢癌发生、发展机制奠定了基础。

关键词：SND1基因、慢病毒载体、SKOV3细胞、卵巢癌

所属期刊栏目：56

分类号：Q591.2;Q784

资助基金：国家杰出青年基金资助项目31125012；教育部“创新团队发展计划” IRT13085；国家自然科学基金资助项目31370749／31571380；天津市应用基础与前沿技术研究计划青年基金项目15JCQNJC09900。

在线出版日期：2016-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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