治疗性低温对缺氧期心肌细胞自噬的影响及机制

摘要：

目的 观察治疗性低温(TH)在缺氧期对心肌细胞自噬活性及自噬流的影响,并探讨其作用机制.方法 取大鼠心肌细胞株H9c2,分为对照组、缺氧组、TH干预组、雷帕霉素干预组、雷帕霉素+TH干预组,对照组置于37℃培养箱中培养,不作处理;缺氧组和TH干预组构建缺氧模型后,分别置于37、32℃培养箱中培养;雷帕霉素干预组和雷帕霉素+ TH干预组于构建模型前2h加入雷帕霉素0.1μmol/L,构建模型后分别置于37、32℃培养箱中培养.采用Western blot法检测对照组、缺氧组和TH干预组自噬相关蛋白自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、p62、Beclin-1蛋白表达,以及应用雷帕霉素前后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体蛋白S6(S6)的表达差异;采用腺病毒GFP-mRFP-LC3荧光瞬时转染技术检测自噬流.结果 ①对照组、缺氧组和TH干预组LC3B、p62、Beclin-1蛋白表达:缺氧组和TH干预组LC3B、Beclin-1高于对照组(P均＜0.05),缺氧组p62降低(P＜0.05).TH干预组LC3B明显低于缺氧组,p62增高(P均＜0.05).缺氧组与TH干预组Beclin-1无统计学差异.②雷帕霉素处理后自噬蛋白LC3B、p62及mTOR通路相关蛋白p-mTOR、p-S6表达:TH干预组与缺氧组比较LC3B降低,而p62、p-mTOR和p-S6均升高(P均＜0.05);雷帕霉素干预组与缺氧组比较LC3B升高,p62降低(P均＜0.05),而p-mTOR和p-S6差异无统计学意义;雷帕霉素+TH干预组与TH干预组比较LC3B升高,p62、p-mTOR和p-S6均降低,结果均有统计学差异(P均＜0.05);雷帕霉素+TH干预组与雷帕霉素干预组比较LC3B降低,p62升高(P均＜0.05),而p-mTOR和p-S6差异无统计学意义.③双荧光自噬流:缺氧组和TH干预组的黄点和红点数多于对照组(P均＜0.05),TH干预组的黄点与红点数少于缺氧组(P均＜0.05).结论 TH能够抑制缺氧期心肌细胞自噬,其机制可能与促进mTOR信号通路相关蛋白表达有关.

关键词：治疗性低温、心肌细胞、缺氧、自噬、雷帕霉素

所属期刊栏目：56

分类号：R541.2(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81400190,81270218;广东省自然科学基金资助项目2015A030310478;广东省科技计划项目2014A020212191

在线出版日期：2016-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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