10.3969/j.issn.1002-266X.2016.21.001
Eμ-VH 启动子调控 c-Myc 表达慢病毒载体的构建及其体外功能
目的:构建人 B 淋巴细胞特异性启动子 Eμ-VH 调控癌基因 c-Myc 表达的慢病毒载体(pEMIR),并探讨其体外功能。方法以 pLV-c-Myc-IRES-增强绿色荧光蛋白(EGFP)为模板,经 PCR 扩增、酶切后得到 pEVCHR;以pEVCHR 为模板,PCR 扩增、酶切后得到慢病毒载体 pEMIR,并行测序和酶切鉴定。将 pEMIR 分别瞬时转染入人源胚胎肾细胞293T、人弥漫大 B 细胞淋巴瘤细胞株(OCL-Ly3、OCL-Ly10),倒置荧光显微镜检测各细胞 EGFP 和单体红色荧光蛋白(mRFP)的表达,用 qRT-PCR 法检测细胞内 c-Myc mRNA 表达,用 Western blotting 法检测293T 细胞c-Myc 蛋白表达。结果Eμ-VH-c-Myc-H2BmRFP 基因片段电泳结果与预测值4129 bp 相符,Vector DNA 电泳可见一条带与预测值8561 bp 相符;pEMIR 酶切并电泳的结果与理论预测值相符;对 pEMIR 质粒进行测序,结果与预期相符,证明 pEMIR 构建成功。三种细胞经 pEMIR 转染后,倒置荧光显微镜下可见绿色和红色荧光,同时转基因c-Myc表达正常。结论成功构建 Eμ-VH 启动子调控 c-Myc 表达的慢病毒载体,体外实验证明该载体能够在人正常细胞和肿瘤细胞中均可发挥功能。
Eμ-VH启动子、c-Myc癌基因、慢病毒载体、弥漫大B细胞淋巴瘤
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R394
广东省产业技术研究与开发专项资金资助项目2013B060300013。
2016-06-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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