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10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.005

脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒RNA 转染人肝癌细胞中的应用效果比较

引用
目的:比较脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒( HCV ) RNA转染人肝癌细胞中的应用效果。方法培养人肝癌细胞Huh7.5-CD81并分为A、B组及对照组。 A组采用电转染质粒pHebei(E1E2)/JFH1来源的HCV RNA;B组采用脂质体转染质粒pHebei(E1E2)/JFH1来源的HCV RNA;对照组采用脂质体转染复制缺陷质粒pJFH1/GND转录获得的HCV RNA。光学显微镜下观察各组转染后细胞形态,采用免疫荧光法( IFA)检测三组转染效率,real-time PCR法检测三组细胞培养液上清中的HCV RNA,采用TCID50法检测A、B组细胞培养液上清中的丙型肝炎病毒(HCVcc)感染滴度。结果 A组转染使用细胞数为1×106,转染后第2天细胞损伤过半,边缘毛糙;B组转染使用细胞数为2×105,转染后第2天细胞基本无损伤。 A组转染效率为9.98%±0.83%,B组转染效率为2.58%±0.39%,两组转染效率相比,P<0.01;对照组未检出荧光阳性细胞。 A、B组转染后细胞培养液上清中HCV RNA拷贝数均呈现先下降后升高的趋势,最终稳定于106 copies/mL。 A组转染后21 d、B组转染后31 d方能检测到HCV感染滴度,A、B组收获HCV最高感染滴度均为104 ffu/mL。结论脂质体转染和电转染两种方法均可建立嵌合HCV的人肝癌细胞培养体系,脂质体转染法对细胞的损伤较小,电转染法转染效率较高、收获HCVcc的时间较短,但两种方法收获的HCVcc感染滴度无明显差异。

丙型肝炎病毒、电穿孔、脂质体、RNA转染

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R373.9(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))

国家自然科学基金资助项目81373229;传染病科技重大专项2013ZX10004601,2013ZX10004609;内蒙古医科大学科技百万项目NY2011BW003。

2016-06-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

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山东医药

1002-266X

37-1156/R

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2016,56(19)

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