酵母双杂交技术筛选宫颈癌 HeLa 细胞cDNA 文库中 FAM92 A1-289关联蛋白
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10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.001

酵母双杂交技术筛选宫颈癌 HeLa 细胞cDNA 文库中 FAM92 A1-289关联蛋白

引用
目的:应用酵母双杂交技术从宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交pGBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选HeLa细胞cDNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质,用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选,对筛选结果进行生物信息学分析,对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证,将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交pGBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289,且对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。筛选出在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高,即增殖细胞核抗原(PCNA)、半乳糖凝集素1(Galectin-1)、内质网高尔基体中间室标记物53(ERGIC-53)、重组人BCL2相关永生基因1(BAG1),并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞cDNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白,为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。

FAM92 A1-289、酵母双杂交技术、宫颈癌、HeLa细胞、增殖细胞核抗原、内质网高尔基体中间室标记物53、BCL2相关永生基因重组人BCL2相关永生基因1、半乳糖凝集素1

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Q78(基因工程(遗传工程))

湖北省自然科学基金资助项目2012FFB02001。

2016-06-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共4页

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