pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建并鉴定pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒,为深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病的生物学作用奠定基础.方法 提取HeLa细胞总RNA,反转录出含Argonaute1的cDNA;以Argonaute1 cDNA为模板,采用PCR法扩增出带有EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到pmCherry-C1载体上;将构建成功的pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒转染入HeLa细胞内,以Western blotting法检测Argonaute1与樱桃红(Cherry)蛋白的融合表达情况;以激光共聚焦显微镜观察细胞内Argonaute1蛋白与细胞应激颗粒的标记蛋白(G3BP)及加工体的标记蛋白(DCP1α)的应激共定位关系.结果 以EcoRⅠ、BamHⅠ单、双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误;融合蛋白表达阳性;当细胞受到应激时,Argonaute1蛋白与G3BP、DCP1α蛋白共定位.结论 本研究成功构建重组pmCherry-C1-Argonaute1质粒.该质粒可有效表达Cherry标记的Argonaute1融合蛋白,有助于深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病领域的生物学作用.

关键词：人类Argonaute1蛋白、pmCherry-C1、重组质粒、融合蛋白、应激颗粒

所属期刊栏目：56

分类号：Q591.2;Q784

资助基金：国家自然科学基金资助项目31370749/31571380;国家杰出青年基金资助项目31125012;教育部"创新团队发展计划"IRT13085;天津市应用基础与前沿技术研究计划15JCQNJC09900

在线出版日期：2016-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：9-12