过表达及沉默细胞黏附分子1基因膀胱癌细胞株的构建

摘要：

目的：构建过表达及沉默细胞黏附分子1（CADM1）基因的膀胱癌细胞株。方法培养并收集膀胱癌细胞株T24。①过表达CADM1基因T24细胞构建：将T24细胞分为1、2、3组，real-timePCR扩增CADM1基因全长，与慢病毒载体pHBLV-IRES-ZsGreen-PGK-puro进行连接（1组），并设载体对照组（2组）和空白对照（3组）；经酶切及测序鉴定正确后在293 T细胞中包装病毒，病毒浓缩后感染T24细胞。②沉默CADM1基因T24细胞构建：将T24细胞分为A、B、C、D、E组，设计3条针对CADM1基因的干扰序列（ siRNA1／2／3）分别与载体pHBLV-U6-shRNA-Zs-Green-Puro进行连接（ A、B、C组），D组与pHBLV-U6-ZsGreen-Puro进行连接，E组为空白对照；经双酶切、PCR及测序鉴定连接载体，在293T细胞中包装病毒，病毒浓缩后感染T24细胞。采用real-time PCR检测T24细胞中的CADM1 mRNA，Western blotting法检测CADM1蛋白。结果过表达和沉默CADM1基因的慢病毒载体及细胞株均正确构建。1、2、3组CADM1 mRNA相对表达量分别为4．84±0．02、1．12±0．03、1．00±0．00，CADM1蛋白相对表达量分别为4．53±0．03、1．05±0．04、1．00±0．01，1组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量高于2、3组（ P均＜0．05）。 A、B、C、D、E组CADM1 mRNA相对表达量分别为0．28±0．05、0．98±0．02、0．74±0．01、0．99±0．01、1．00±0．00，CADM1蛋白相对表达量分别为0．33±0．04、0．86±0．12、0．67±0．07、1．00±0．04、1．00±0．03，A组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量低于B、C、D、E组（P均＜0．05）。结论成功构建了过表达及沉默CADM1基因的膀胱癌细胞株T24。

关键词：膀胱肿瘤、膀胱癌细胞株、细胞黏附分子1、基因沉默

分类号：R737.14(肿瘤学)

资助基金：天津市自然科学基金重点项目12JCZDJC23700。

在线出版日期：2016-04-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：20-23