含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的：构建含人干细胞白血病（SCL）基因的重组慢病毒表达载体（GV287-SCL），为糖尿病膀胱异常病症（ DCP）的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增，与慢性病毒穿透质粒结合，构建重组穿梭质粒GV287-EGFP／SCL，共转染293T 细胞，通过多次感染、扩增和提纯，得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293 T细胞，采用Western blotting法检测目的基因，荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1036 bp，与目的基因相关片段中SCL cDNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带，其大小与目的片段人SCL cDNA相当。重组质粒GV287-EGFP／SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP，基因排序和GenBank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108 TU／mL。结论成功构建了GV287-SCL，病毒滴度为5×108 TU／mL。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。

关键词：糖尿病膀胱异常病症、干细胞白血病基因、慢病毒载体、转染、Cajal样间质细胞

分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81360120。

在线出版日期：2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：15-17