大鼠 BMSCs 向心肌样细胞分化过程中miR－128对 Nkx2－5基因的调控作用

摘要：

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞（ BMSCs）向心肌样细胞分化过程中miR－128对Nkx2－5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs，应用5－氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞，采用Real－time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR－128、Nkx2－5基因的表达。用生物信息学方法对miR－128和Nkx2－5基因的靶向匹配关系进行预测，显示miR－128与Nkx2－5 mRNA的3′UTR结合情况良好。提取心肌细胞总RNA，扩增Nkx2－5 mRNA 3′UTR片段，构建Nkx2－53′UTR－pmirGLO荧光素酶报告载体，双荧光素酶检测转染Nkx2－53′UTR－pmirGLO以及miR－128模拟物或对照miRNA的荧光强度，鉴定miR－128与Nkx2－5的靶向关系。结果将诱导6 d的Nkx2－5和miR－128的表达量分别设为1，诱导10 d的Nkx2－5表达量为4．33±1．32、22 d为14．78±6．05，诱导10 d的miR－128表达量为0．7762±0．0543、22 d为0．1976±0．0836。 miR－128与Nkx2－5的表达呈负相关（r＝－0．546，P＝0．021）。相对于转染对照miRNA（设定其荧光素酶活性为1），转染miR－128能使Nkx2－53′UTR－pmirGLO的荧光素酶表达下降为0．4354±0．0726。结论 miR－128通过结合Nkx2－5 mRNA 3′UTR抑制其表达，具有负性调控BMSCs向心肌样细胞分化过程中Nkx2－5表达的作用。

关键词：微小核糖核酸、Nkx2-5基因、骨髓间充质干细胞、心肌样细胞、大鼠

分类号：R33(人体生理学)

在线出版日期：2015-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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