MPC30-DEA70载 microRNA-21AS-ODN转染心肌成纤维细胞的可行性分析

摘要：

目的：探讨阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否成功载microRNA-21反义寡核苷酸（AS-ODN）转染大鼠心肌成纤维细胞，以及转染后MPC30-DEA70／microRNA-21ODN复合物对大鼠心肌成纤维细胞microRNA-21的基因沉默效应和microRNA-21下游产物的抑制作用。方法制备不同氨基与磷酸根比值（ N∶P）的MPC30-DEA70／microRNA-21ODN复合物；差速贴壁法分离大鼠心肌成纤维细胞并培养；利用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜观察MPC30-DEA70／microRNA-21ODN复合物（FAM标记）在细胞内的分布；采用Western blotting法和RT-PCR法分别检测细胞外调节激酶（ERK）-丝裂原活化蛋白（MAP）激酶、Ⅰ型胶原蛋白及pre-microRNA-21的表达。结果原代培养的大鼠心肌成纤维细胞光镜下呈三角形或不规则多边形，核居中；MPC30-DEA70／microRNA-21ODN复合物在心肌成纤维细胞中具有较高的转染率，且呈剂量依赖性（P均＜0．05），共聚焦激光扫描显微镜示复合物大部分分布于核周，少部分进入细胞核；MPC30-DEA70载microRNA-21ODN进入心肌成纤维细胞后下调pre-microRNA-21、ERK-MAP激酶及Ⅰ型胶原蛋白的表达（P均＜0．05）。结论 MPC30-DEA70能成功并有效转载microRNA-21ODN进入心肌成纤维细胞，使microRNA-21及其下游信号通路ERK-MAP激酶、Ⅰ型胶原蛋白表达下调，是一种有效的转基因载体。

关键词：心肌成纤维细胞、MPC30-DEA70、microRNA-21ODN、细胞转染、大鼠

分类号：R361.3(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30800219，30670557；江苏省高校自然科学基金资助项目08KJD320013；徐州医学院院长专项人才基金项目07KJZ26。

在线出版日期：2015-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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