pMaxGFP 导入人肝癌 HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件优选

摘要：

目的：优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件。方法取对数生长期的人肝癌HepG2细胞，采用磷酸钙转染法将pMaxGFP导入HepG2细胞，转染前1 h换不同血清浓度的新鲜培养液培养HepG2细胞，血清浓度分别为无血清、1％、2％、5％、10％、15％。转染48 h后以倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达，评估转染效率，同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率，优选出最适血清浓度。在最适血清浓度条件下，磷酸钙转染法将pMaxGFP转染贴壁状态和悬浮状态的HepG2细胞，共分为A、B、C、D、E 5组，分别代表转染贴壁状态、悬浮状态3×104细胞/孔、4×104细胞/孔、5×104细胞/孔、6×104细胞/孔。转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，评估转染效率，同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率，优选出最适的细胞状态和细胞密度。结果48h后，无血清组HepG2细胞大量死亡，而其他组有较少部分细胞死亡。1％、2％、5％、10％、15％血清浓度的转染效率分别为30．92％±1．29％、30．10％±1．05％、21．27％±0．63％、19．10％±0．51％、10．44％±1．42％，血清浓度为1％、2％时的转染效率明显高于其他血清浓度，P＜0．05；1％、2％、5％、10％、15％血清浓度的细胞存活率分别为76．01％±0．94％、89．68％±0．68％、92．38％±1．02％、93．36％±1．35％、93．49％±0．91％，血清浓度为2％时的细胞存活率明显高于1％血清浓度。在转染培养基血清浓度为2％条件下， A、B、C、D、E组转染效率分别为30．74％±0．50％、6．38％±0．28％、31．41％±0．42％、30．94％±0．47％、1．41％±0．27％， A、C、D组转染效率明显高于B、E组，P﹤0．05；A、B、C、D、E组细胞存活率分别为91．76％±0．99％、88．40％±1．29％、88．38％±1．08％、87．48％±0．78％、64．45％±0．55％，A、B、C、D组细胞存活率明显高于E组。结论优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中的磷酸钙转染法应用条件为转染培养基中血清浓度2％、悬浮状态下细胞密度为4×104细胞/孔或5×104细胞/孔。

关键词：磷酸钙转染法、细胞转染、细胞存活率、细胞状态

分类号：R735.7;Q819(肿瘤学)

资助基金：湖南省科技厅课题资助项目98 SSY1003。

在线出版日期：2014-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：23-26