顺铂对 siRNA 抑制 ERCC1基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响

摘要：

目的：观察顺铂（cDDP）对小分子干扰RNA（siRNA）抑制切除修复交叉互补基因1（ERCC1）基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响，并探讨 cDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性。方法根据ERCC1基因序列，设计合成3对特异性的siRNA（分别命名为S1、S2、S3），同时合成阴性对照 siRNA（命名NC）。取对数生长期的A549细胞，采用Lipofectamine2000脂质体转染法进行S1、S2、S3、S1＋S2＋S3及NC转染，real-time RT-PCR和Western blotting技术检测ERCC1 mRNA和蛋白。结果与NC相比， S1、S2、S3及S1＋S2＋S3均能下调ERCC1表达，但S1＋S2＋S3下降最为显著。用NC及S1＋S2＋S3转染A549细胞，24 h后加入0、0．5、1、2、4、8μg/mL的cDDP，采用 MTS法计算细胞生存率及cDDP对细胞的半数抑制浓度（ IC50）。 A549细胞转染后48 h加4μg/mL的cDDP，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果加入0、0．5、1、2、4、8μgm/L 的cDDP，NC转染的 A549细胞存活率分别为100．00％±3．21％、94．86％±7．14％、89．79％±3．29％、66．67％±5．40％、33．31％±1．79％、19．12％±0．41％，S1＋S2＋S3转染的A549细胞存活率分别为100．0％±6．53％、71．63％±8．23％、59．33％±0．94％、37．42％±1．57％、19．41％±1．41％、12．75％±0．27％，相同cDDP浓度下A549细胞存活率比较，P均＜0．05；S1＋S2＋S3、NC转染细胞的IC50分别为（1．25±0．11）、（3．09±0．36）μg/mL，二者比较，P＜0．01。未加cDDP时，NC与S1＋S2＋S3转染A 549的细胞凋亡率分别为8．06％±1．79％、14．96％±0．47％，加入cDDP后，细胞凋亡率分别为24．61％±1．98％、43．90％±3．01％，二者比较，P均＜0．05。结论 cDDP能降低siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞增殖能力及IC50，并诱导细胞凋亡；cDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性升高。

关键词：切除修复交叉互补基因1、RNA干扰、顺铂、肺肿瘤、肺癌

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：中国博士后科学基金面上资助项目2012M521588。

在线出版日期：2014-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4-7