AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建人水通道蛋白5(AQP5)基因慢病毒载体.方法 体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用Mlu I和Sal I进行双酶切,将AQP5全长序列克隆人pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析.重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞(人胚肾细胞),培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞(胃癌细胞)的转染效率.Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白.结果 测序结果和Westem blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达.与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml.结论 成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体.

关键词：水通道蛋白、SGC7901细胞、293T细胞、慢病毒载体

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分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30901421;江苏省卫生厅开放课题基金资助项目XK03200903

在线出版日期：2012-02-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：17-18