以蛋白质磷酸酶CDC25A/B为靶标的抗癌药筛选体系的构建

摘要：

目的 通过克隆和表达人蛋白质磷酸酶CDC25A/B融合蛋白,探讨构建高通量靶向抗癌药筛选体系的途径.方法 采用RT-PCR技术克隆人CDC25A/B催化区结构域cDNA序列,构建pGEX-4T-1-CDC25A/B原核表达质粒,表达和纯化携带还原型谷胱甘肽(GSH)标签的融合蛋白.以对硝基苯基磷酸盐(pNPP)为底物,在96孔板上建立分别以GST-CDC25A/B为靶标的筛选体系,应用维生素K3(VK3)进行验证性抑制剂筛选.结果 成功表达和纯化了GST-CDC25A/B融合蛋白,建立了相应的高通量磷酸酶抑制剂筛选体系.在相同反应条件下,GSTCDC25B对pNPP的水解活性是GST-CDC25A的6倍.VK3对CDC25A/B的半数抑制浓度(IC50)分别为0.8和1.8μg/ml.结论 通过表达和纯化CDC25A/B催化区结构域与GST的融合蛋白,可以高效率的建立靶酶抑制剂高通量筛选体系,为进一步研发VK3衍生物类新型靶向抗癌药奠定了基础.

关键词：靶向抗癌药、CDC25磷酸酶、GST融合蛋白、高通量筛选、对硝基苯磷酸盐

所属期刊栏目：51

分类号：R979.1(药品)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30570413；北京大学985细胞生物学重点学科建设项目

在线出版日期：2011-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：8-11