介导EGFR siRNA转染肝癌HepG2细胞的试剂筛选及条件优化

摘要：

目的 筛选介导表皮生长因子受体(EGFR)小干扰RNA( siRNA)转染肝癌HepG2细胞的试剂,并优化转染条件.方法 设计靶向EGFR的特异性siRNA,分别用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介导转染肝癌HepG2细胞48、72 h.实时定量RT-PCR检测HepG2细胞的EGFR mRNA,计算敲除EGFR mRNA率,据此筛选出最佳转染试剂,继续进行不同试剂用量、不同siRNA浓度、正反向转染的对比.测算转染后细胞存活率及转染率.结果 Lipofectamine 2000、siPORT Amine及 combiMAGnetofection介导转染72 h后,HepG2细胞的EGFR mRNA敲除率均超过65%.2 μl的 combiMAGnetofection及200 nM的 EGFR siRNA组合、72 h时HepG2细胞的EGFR mRNA沉默效率最高 (90%±1%),其细胞存活率为94%±8%,转染率超过95%.结论 介导EGFR siRNA转染HepG2细胞的最佳试剂是combiMAGnetofection,优化转染条件为2 μl的combiMAGnetofection、200 nM的 EGFR siRNA、转染72 h.

关键词：RNA干扰、表皮生长因子受体、小干扰RNA、基因转染介质、肝癌细胞

所属期刊栏目：51

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：广西自然科学基金资助项目1013059

在线出版日期：2011-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：18-20