GFP示踪FLAG抗原表位标记BMP2转基因腺病毒穿梭质粒的构建

摘要：

目的 构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP2)目的蛋白和示踪绿色荧光蛋白(GFP)报告分子的腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1.方法 采用PCR技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因诱变,去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点XhoⅠ.测序检测诱变情况,将诱变后的BMP2基因定向导入pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1,将质粒分别转染人胚肾细胞HEK293A和兔骨髓间充质干细胞(MSCs).通过限制性内切酶酶切图谱分析该质粒;采用荧光显微镜检查和免疫组化SP法测定HEK293A中的GFP和MSCs中的BMP2,行重组腺病毒穿梭质粒鉴定.结果 质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1经双酶切鉴定图谱分析构建正确,HEK293A、MSCs中均有GFP和BMP2表达.结论 pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1构建成功.

关键词：骨形态发生蛋白2、重组腺病毒、质粒、绿色荧光蛋白、抗原表位

所属期刊栏目：51

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：辽宁省自然科学基金资助项目20062199

在线出版日期：2011-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

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