E2F-1真核表达载体的构建和Genectin抗性细胞的筛选

摘要：

目的 通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株.方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶 EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.结果 重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因完全一致.获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Western blot证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.结论 成功获取具Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,为下一步的功能实验奠定了基础.

关键词：E2F-1、胃肿瘤、MGC-803细胞、转染

所属期刊栏目：50

分类号：R735.2;R73-35(肿瘤学)

资助基金：广西省自然科学基金资助项目0640085

在线出版日期：2011-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：19-21