pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体的构建及体外表达

摘要：

目的 构建毕氏酵母表达载体pPIC9K/Ang-1,并进行体外表达研究.方法 从PGEM-T/Ang-1载体中切取目的 片段Ang-1,利用定向克隆到毕氏酵母表达载体pPIC9K中,测序正确后, pPIC9K/Ang-1载体经SalⅠ酶切线形化,以电转化法导入GS115毕氏酵母菌株中,经YPD平板G418抗性筛选后获得Ang-1表达阳性菌株;用SDS-PAGE测定其分子量,用Western Blotting检测发酵上清中Ang-1的抗原性和表达量.结果 成功切取1.5 kb的Ang-1片段,成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,Blast序列分析与GenBank中AY121504一致.酶切线性化的质粒成功转入GS115毕氏酵母中,诱导表达后SDS-PAGE显示重组人Ang-1分子量约66 kD,Western Blotting证实为人Ang-1.结论 成功构建pPIC9K/Ang-1毕氏酵母表达载体,成功获得稳定分泌Ang-1重组蛋白的基因工程菌株.

关键词：血管生成因子、克隆、毕氏酵母、基因治疗

所属期刊栏目：49

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30670723, 30973079

在线出版日期：2010-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：22-24