B7-1转基因骨肉瘤疫苗的制备及鉴定

摘要：

目的构建含B7-1 基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,转染LM8骨肉瘤细胞制备骨肉瘤疫苗.方法用RT-PCR法扩增B7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达载体,酶切、测序鉴定构建质粒;采用脂质体介导方法将其转染到LM8细胞,并用荧光显微镜及LCM结合蛋白免疫印记检测其在肿瘤疫苗细胞中的表达.结果经PCR 及酶切鉴定,证实成功构建了含B7-1基因的真核表达重组体pEGFP-C1/B7,重组子测序结果与国际基因文库中mB7-1序列相符.用荧光显微镜观察到疫苗细胞中有GFP表达,RT-PCR检测到疫苗细胞中B7-1 基因的表达,westernblot发现疫苗细胞中有B7蛋白的表达.结论 B7-1重组真核绿色荧光表达载体pEGFP-C1/B7已成功构建,转染LM8细胞成功制备了骨肉瘤细胞疫苗.

关键词：B7基因、绿色荧光蛋白、肿瘤疫苗、骨肉瘤

所属期刊栏目：45

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：湖北省武汉市青年科技晨光计划20025001028

在线出版日期：2005-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：10-12