截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达

摘要：

目的:研究A组轮状病毒(RV)组特异性抗原(VP6)片段的表达,为RV免疫检测技术提供材料.方法:以pcDNA3.1-VP6为模板,通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6-1,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-5X,在E.coli中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.通过改变宿主菌、培养基、IPTG浓度和培养温度等条件,提高目的蛋白的可溶性表达水平,使用GST-Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化.结果:选定VP6氨基酸12～143片段为目的蛋白,PCR扩增其396bp的编码基因片段,构建出pGEX-5X-VP6-1.将该重组质粒转化E.coli后,SDS-PAGE和Western blotting分析均显示,含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST::VP6-1在E.coli中获得高效表达,约占菌体总蛋白的30%.该蛋白主要以包涵体形式存在,经条件优化,最终通过低浓度IPTG、低温诱导提高重组蛋白的可溶性表达水平,GST亲和层析可对其进行初步纯化.结论:VP6-1蛋白在E.coli中可被高效表达和纯化,为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于免疫检测打下基础.

关键词：轮状病毒属、原核细胞、基因表达

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分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技攻关项目2003BA712A03-04;国家科技攻关项目2003AA215071,2002AA206641

在线出版日期：2006-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：433-437,442