人破伤风免疫噬菌体抗体库的建立及鉴定

摘要：

目的:建立人破伤风免疫噬菌体抗体库,筛选抗破伤风类毒素的抗体基因,并在大肠杆菌中表达可溶性Fab段.方法:从破伤风类毒素免疫志愿者中分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,用一组人IgG Fab基因特异性引物,从合成的cDNA中经PCR扩增出抗体轻链(VL+CL)和重链Fd(VH+CH1)基因,分别经XbaⅠ/SacⅠ和SpeⅠ/XhoⅠ酶切克隆入噬菌粒pComb3.用破伤风外毒素作为抗原进行筛选富集获得特异性抗破伤风类毒素的噬菌体抗体,切去噬菌体外壳蛋白基因Ⅲ(gⅢ),表达可溶性人抗破伤风类毒素的Fab段.结果:经核苷酸序列分析证实,所获得的基因为人IgG Fab基因;用ELISA鉴定表明,表达的人IgG Fab抗体能特异性地与破伤风外毒素结合.结论:利用噬菌体抗体库技术筛选可得到与破伤风外毒素特异性结合的人抗破伤风类毒素基因工程抗体.

关键词：破伤风类毒素、噬菌体、免疫球蛋白类、Fab、抗体、细菌

所属期刊栏目：42

分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA2Z3338

在线出版日期：2005-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：636-639