人血管内皮生长因子C基因真核表达载体的构建

摘要：

目的:构建人血管内皮生长因子C(vascularendothelial growth factor C,VEGF-C)基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C基因在淋巴管生成中的作用.方法:根据人VEGF-C的cDNA序列,设计合成一对5'端分别含有EcoR I和BamH I酶切位点的特异性引物,运用RT-PCR方法克隆人乳腺癌细胞MDA-MB-231中的VEGF-C cDNA(1.26 Kb);回收PCR产物(1.28 Kb),并将其连接至克隆载体pMD18-T中;重组的pMD18-T在大肠杆菌DH5α内扩增后,经质粒提取、EcoR I和BamH I酶切,筛选出阳性重组子,并进行基因测序鉴定;琼脂糖凝胶电泳回收含有VEGF-C cDNA全长的酶切片断(1.27Kb),然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3.1(一)连接,重组质粒经EcoR I和BamH I酶切予以鉴定.结果:RT-PCR产物含有VEGF-C cDNA,基因测序显示重组的pMD18-T中含有正确的人VEGF-C cDNA全长序列,重组的pcDNA3.1㈠中含有人VEGF-C cDNA全长序列.结论:成功构建了人类VEGF-C真核表达载体VEGF-C/pcDNA3.1㈠.

关键词：内皮、血管、内皮生长因子、基因、真核表达、载体

所属期刊栏目：41

分类号：R343.1(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：151-154