白芍总苷对角质形成细胞炎症反应和凋亡的影响

摘要：

目的:探讨银屑病与细胞炎症反应、凋亡有关的机制及相关分子信号通路,分析白芍总苷(TGP)发挥治疗作用的机制.方法:收集并分析临床银屑病患者全基因转录组表达测序结果,分析与银屑病发病相关的主要信号通路与分子靶点.使用不同浓度的白细胞介素-17(IL-17)刺激HaCaT细胞,构建银屑病细胞模型,在不同时间点采用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测细胞活性的变化,并确定IL-17的最佳作用浓度及作用时间.使用不同浓度的TGP处理后,检测角质形成细胞活性的变化.使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-17诱导HaCaT细胞中炎症相关分子的表达,并与TGP处理后的IL-17诱导HaCaT细胞炎症-凋亡相关分子表达结果进行对比.使用生物信息学数据库预测与细胞炎症-凋亡因子相关的转录因子.敲除转录因子相关基因后,检测IL-17处理的HaCaT细胞中炎症-凋亡因子表达,验证相关转录因子的表达调控作用.使用蛋白质印迹法(WB)和免疫荧光技术检测IL-17诱导的HaCaT细胞中炎症-凋亡相关分子的表达,并与TGP处理后IL-17诱导的HaCaT细胞进行对比,分析TGP的治疗机制.实验中采用随机分组并同步处理细胞,分为IL-17组、对照组及TGP+IL-17组,并使用Graph Pad-Prism 6软件,采用t检验对结果进行分析.结果:全基因转录组表达测序结果显示,IL-17相关信号通路评分最高,其下游分子靶点包括IL1B、趋化因子配体(CXCL)1/2/10、趋化因子配体20(CCL20)等.细胞活性结果显示,使用IL-17诱导HaCaT细胞的最佳浓度为12.5 mmol/L,最佳处理时间为24 h.使用不同浓度TGP处理发现,40 μg/mL质量浓度效果最佳,且处理24 h后IL-17组细胞活性明显升高(P＜0.01).IL-17组炎症-凋亡相关分子靶点IL1B、CXCL1/2/10、CCL20 RNA表达水平明显升高,TGP+IL-17组分子靶点的表达明显下调.生物信息学数据库预测发现信号转导与转录激活因子3(STAT3)是IL1B、CXCL1/2/10、CCL20的潜在转录调节因子,敲除STAT3后,炎症相关因子的表达明显降低.WB结果显示,IL-17组HaCaT细胞中STAT3磷酸化水平明显升高(P＜0.01),同时细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达明显升高(P＜0.05);TGP+IL-17组STAT3磷酸化水平和细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达明显降低(P＜0.05).免疫荧光结果显示,TGP+IL-17组STAT3磷酸化水平明显低于IL-17组(P＜0.01).结论:IL-17相关信号通路在银屑病的发展中起主导地位;TGP可能通过抑制STAT3的磷酸化,降低角质形成细胞的炎症反应和细胞凋亡.

关键词：银屑病、细胞凋亡、炎症反应、信号转导与转录激活因子3、白芍总苷

所属期刊栏目：47

分类号：R289.1(中药学)

资助基金：国家自然科学基金82104876

在线出版日期：2023-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：471-479