淋巴细胞抗原6复合物基因座E抑制新型冠状病毒不同变异株刺突蛋白介导的感染侵入

摘要：

目的 研究淋巴细胞抗原 6 复合物,基因座E(lymphocyte antigen 6 complex,locus E,LY6E)对新型冠状病毒(severe acute respiratpry syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)不同变异株刺突蛋白(spike protein,S蛋白)介导的感染侵入的抑制作用.方法 构建来源于人的血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)表达质粒;建立Flp-In T-Rex 293/LY6E诱导表达细胞系和Flp-In T-Rex 293/氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)诱导表达细胞系,转染人ACE2 表达质粒,并通过免疫印迹方法检测ACE2和LY6E在T-Rex 293 细胞中的表达情况;构建SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1 株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron BA.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5、BF.7突变株系)和拉沙热病毒(Lassa fever virus,LASV)假病毒感染系统,利用假病毒荧光素酶报告基因检测LY6E对SARS-CoV-2及其突变株刺突蛋白介导侵入的抑制作用;通过Nano-Glo?活细胞检测系统,检测LY6E对SARS-CoV-2突变株刺突蛋白介导的合胞体形成的抑制作用;构建甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)假病毒感染系统,经两性霉素B处理后,利用假病毒荧光素酶报告基因检测LY6E对SARS-CoV-2及其突变株刺突蛋白介导侵入的抑制作用.结果 构建的Flp-In T-Rex293/LY6E诱导表达细胞系对SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron BA.1突变株系)假病毒侵入细胞有明显抑制作用,SARS-CoV-2假病毒感染四环素(tetracycline,Tet)处理组与非处理组的相对感染率差异有统计学意义[SARS-CoV-2 野生型株系假病毒(WTpp):t=33.920,P＜0.001;SARS-CoV-2 突变株系假病毒(D614Gpp):t=31.478,P＜0.001;Deltapp:t=30.257,P＜0.001;Omicronpp:t=21.041,P＜0.001];LY6E对SARS-CoV-2 不同突变株S蛋白介导的合胞体形成有明显抑制作用,LY6E表达组与未表达组的相对荧光单位差异有统计学意义(D614G:t=18.90,P＜0.001;Delta:t=22.28,P＜0.001;BA.1:t=8.995,P＜0.001;BA.2:t=13.57,P＜0.001;BA.2.12.1:t=15.48,P＜0.001;BA.3:t=13.65,P＜0.001;BA.4/5:t=16.74,P＜0.001;BF.7:t=22.29,P＜0.001);两性霉素B处理没有改变Flp-In T-Rex 293/LY6E诱导表达细胞系对SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron BA.1 突变株系)假病毒侵入细胞的抑制作用,也没有改变LY6E对IAV感染的增强作用,IAV假病毒感染Tet处理组与非处理组的相对感染率差异有统计学意义(t=3.343,P＜0.05).结论 LY6E抑制SARS-CoV-2野生型(Wuhan-Hu-1 株系)及多种突变株(D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron突变株系)刺突蛋白介导的感染侵入;两性霉素B没有改变LY6E对SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1 株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron突变株系)的抑制作用.

关键词：淋巴细胞抗原6复合体、基因座E、新型冠状病毒、Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株、Omicron株、抗病毒效应

所属期刊栏目：44

分类号：R394

在线出版日期：2023-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：652-662