不同固定剂对鼻息肉上皮细胞免疫荧光染色的影响

摘要：

目的 通过激光共聚焦技术,观察鼻息肉体外培养上皮细胞在3种不同固定剂作用下的免疫荧光染色效果,探讨不同固定剂对免疫荧光染色结果的影响,从而选择最佳固定方法.方法 用酶消化法分离培养鼻息肉上皮细胞,接种培养7d后,分别用4% (质量分数)多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)、等体积甲醇丙酮混合液及甲醇室温固定,1% (体积分数) Triton X-100透膜,山羊血清封闭,滴加一抗4 ℃过夜,滴加相应荧光二抗,含DAPI封片剂封片,激光共聚焦显微镜观察.结果 等量甲醇丙酮混合液及甲醇对标记的4个标记蛋白均有较好的固定作用;4% (质量分数) PFA对跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A, TMEM16A)固定效果差,对紧密连接蛋白(zonular occludens-1,ZO-1)的固定效果不理想.结论 甲醇丙酮混合液及甲醇对标记的4个标记蛋白的固定作用均较好,为体外培养细胞免疫荧光染色最佳固定剂的选择提供参考.

关键词：固定剂、上皮细胞、免疫荧光、激光共聚焦

所属期刊栏目：41

分类号：R76(耳鼻咽喉科学)

资助基金：国家自然科学基金重点项目;国家重点研发计划;教育部长江学者及创新团队发展计划;北京市医院管理局使命人才计划;北京市自然科学基金面上项目

在线出版日期：2020-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：189-193