热变性对外周血细胞亚群标记效果的影响

摘要：

目的 探讨热变性对外周血细胞亚群标记效果的影响,从而建立稳定的流式-荧光原位杂交技术流程(flow cytometry-fluorescence in situ hybridization,Flow-FISH).方法 采集10例健康人肝素抗凝新鲜外周血标本,分别以Alexa Fluor(@) 647标记的CD3、CD19、CD14抗体标记T淋巴细胞、B淋巴细胞和单核细胞,高温变性后,采用流式细胞术分析热变性前后细胞系列特异性抗原表达的变化;以Fluor(@) 647-CD3标记外周血T淋巴细胞,以4种浓度的Bis[sulfosuccinimidyl] suberate(BS3)交联剂进行抗原抗体交联,比较不同浓度BS3的交联效果.结果 高温变性后,Alexa Fluor(@) 647标记的CD3和CD19的荧光强度减弱,但仍能有效区分出T淋巴细胞和B淋巴细胞;Alexa Fluor(@) 647-CD14的荧光强度无变化,单核细胞清晰可辨;4种浓度交联剂BS3作用后,CD3的标记效果基本一致.结论 经过热变性后,Alexa Fluor(@) 647标记的CD3、CD19、CD14抗体仍能够有效标记出血细胞中的不同细胞亚群,耐热性好,可以用于Flow-FISH技术中;交联剂BS3的适宜作用浓度为2.5 mmol/L.

关键词：热变性、细胞亚群、交联剂、流式细胞术

所属期刊栏目：35

分类号：R55(血液及淋巴系疾病)

资助基金：This study was supported by National Natural Science Foundation of China81000200;Beijing Health and Technical Personal of High level Plan2011-3-092;Basic-clinic Cooperative Foundation of Capital Medical University12JL28.国家自然科学基金81000200;北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目2011-3-092;首都医科大学基础临床合作研究基金12JL28

在线出版日期：2014-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：551-554