慢病毒载体介导的人磷脂磷酸水解酶3基因在人脐带间充质干细胞中的表达

摘要：

目的 体外分离和培养人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cell,UC-MSCs),并将含有人磷脂磷酸水解酶3(human lipid phosphate phosphatases 3,hLPP3)的慢病毒载体转染UC-MSCs,探讨hLPP-3在UC-MSCs中的表达.方法 从脐带中分离单细胞,经细胞形态学、流式细胞仪(FACS)检测、细胞分化潜能判定,鉴定UC-MSCs的生物学特性.同时将hLPP-3基因克隆入慢病毒载体,包装出病毒上清,以不同拷贝数转染UC-MSCs,用免疫印迹和实时定量PCR技术分别测定不同转染组hLPP-3的蛋白及mRNA表达水平.结果 成功在体外分离和培养了UC-MSCs,并诱导其向脂肪、骨、软骨细胞分化.流式细胞仪检测结果显示脐带MSC表达CD90、CD73及CD105,而不表达CD14、CD34、CD45、CD19、HLA-DR、CD11b及CD106蛋白.用含hLPP-3-GFP融合基因的慢病毒载体转染UC-MSCs,实时定量PCR检测发现,hLPP-3的mRNA转录水平与转染拷贝数有关,转染拷贝数越高,hLPP-3的表达量越高;转染后1个月,免疫印迹发现hLPP-3-GFP依然维持高表达.结论 成功地在体外分离和培养了UC-MSC,并用含有hLPP-3基因的慢病毒载体转染UC-MSCs,通过转染拷贝数在一定水平上调控了UC-MSC中hLPP-3 mRNA的转录水平和蛋白表达量.

关键词：脐带、间充质干细胞、胶质源性神经营养因子、慢病毒载体、转染

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分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金81272804,81071011;教育部重点项目210003;江苏省卫生厅资助项目H201049;北京市教育委员会科技计划项目KZ201310025024,KM201010025015;北京市科技新星计划2009B22

在线出版日期：2014-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：872-878