γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

摘要：

目的 对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化.方法 根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白.结果 γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白.经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白.结论 成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础.

关键词：γ-突触核蛋白、融合蛋白、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：32

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

在线出版日期：2011-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：254-258