10.3969/j.issn.1006-7795.2006.06.021
绿色荧光蛋白和酪氨酸羟化酶在骨髓基质细胞中的表达
目的 研究反转录病毒介导的绿色荧光蛋白(EGFP)基因和酪氨酸羟化酶(TH)基因在原代培养的骨髓基质细胞(bMSCs)中的表达情况.方法 体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs,原代培养8~10 d后, 同时利用含EGFP和TH基因的反转录病毒上清依次转染bMSCs并进行抗性筛选,7~10 d可得到稳定表达EGFP的bMSCs,在稳定转染EGFP后10 d进行TH病毒上清的转染,7~10 d可得到稳定表达TH和EGFP的bMSCs.结果 原代培养bMSCs 3~4 d后生长至70%~80%汇合,病毒转染EGFP后第2天,细胞呈现弱荧光,经G418筛选2~3 d后出现阳性细胞,约8~10 d生长融合,阳性率60%~70%,第2~5代阳性细胞比率无明显变化.TH阳性率也达60%以上.结论 利用反转录病毒载体可有效地将EGFP和TH基因转至bMSCs中,并能在体外稳定表达传代.这种表达EGFP和TH的bMSCs对于研究bMSCs的体内迁移分化及帕金森病(PD)的基因治疗具有重要意义.
绿色荧光蛋白、酪氨酸羟化酶、骨髓基质细胞、反转录病毒载体
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R3(基础医学)
北京市自然科学基金7042008;国家重点基础研究发展计划973计划2006CB500706
2007-01-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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