LAMP法检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7

摘要：

目的 建立一种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loop mediated isothermal amplification,LAMP).方法以牛奶为研究对象,分别利用金黄色葡萄球菌nuc,鼠伤寒沙门菌invA和大肠杆菌O517:H7的rfbE保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应温度、时间等条件,建立检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应体系.并验证了本方法的特异性和灵敏度.结果 LAMP法对牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的灵敏度均为1.0×102拷贝/μL,比常规PCR灵敏度提高了10倍.金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应条件为60℃、30min,鼠伤寒沙门菌为60℃、60min.利用SYBR Green I染料在紫外光下可直接观察检测结果,金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7阳性样品均呈绿色;进一步利用荧光定量PCR仪可检测到对应的扩增曲线.通过牛奶样品模拟掺杂实验,验证了方法的实用性和可靠性.结论 本研究建立的检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点,可用于牛奶中相关致病菌的检测,对预防和控制3种致病菌的传染有重要意义.

关键词：环介导恒温扩增、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O517:H7

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分类号：TS207.4(食品工业)

资助基金：基础研究重大项目前期研究专项2016YFD0501400

在线出版日期：2018-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：381-387