p53-EGFP表达载体的构建及其对A549的影响

摘要：

构建具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体,并验证其对肺癌细胞A549的影响.以质粒pcDNA3.1-p53为模板,设计引物并进行PCR扩增获得目的基因p53,将获得的目的基因克隆至载体pcDNA3.1-EGFP上,用琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,双酶切以及测序验证.将克隆好的载体,利用脂质体法转染A549细胞,荧光显微镜下观察,同时用MTT法测不同时间段细胞OD值.结果表明,琼脂糖凝胶电泳结果显示,目的基因扩增成功.双酶切及DNA测序结果均证实,成功构建了载体pcDNA3.1-EGFP-p53.转染A549细胞后,荧光显微镜下观察到绿色荧光.MTT法测定结果表明,目的基因转染的A549细胞组所测得的OD值明显低于对照组(p<0.01).因此,具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体pcDNA3.1-EGFP-p53构建成功,转染A549细胞后,对A549细胞具有一定抑制作用.为后续继续研究p53-MDM2生物发光能量共振转移作用奠定了基础.

关键词：EGFP、抑癌基因、p53、表达载体、A549细胞

所属期刊栏目：38

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金地区基金81660576;贵州省科技计划社会攻关计划项目黔科合[2016]支撑2909;贵州省科技重大专项子课题黔科合J重大字[2015]2002-3-4;贵州省高层次创新型人才培养黔科合人才20154032号;贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心黔科合G字20154001号

在线出版日期：2019-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

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