杜仲EuCHIT1基因表达载体构建及在大肠杆菌中的表达

摘要：

构建了T7启动子驱动杜仲几丁质酶基因EuCHIT1的原核表达载体pET-EuCHIT1和pMCSG-EuCHIT1,其表达产物分别含6个组氨酸(6His)标签和6个组氨酸连接的麦芽糖结合蛋白(his6-tag–maltose-binding pro-tein, MBP)标签,分别将重组载体遗传转化大肠杆菌细胞BL21(DE3),在37℃、150 rpm条件下培养至菌液OD值为0.4~0.8后,转到16℃、150 rpm条件下以1 mM IPTG诱导培养12 h,表达产物经SDS-PAGE分析,pET-Eu-CHIT1/BL21( DE3)表达以包涵体形式存在36.03 kD融合蛋白,pMCSG-EuCHIT1/ BL21( DE3)成功表达可溶形式存在的77.21 kD融合蛋白。故可以使用pMCSG-EuCHIT1/ BL21( DE3)获得可溶的融合蛋白,为之后的EuCH-IT1的多克隆抗体的制备和及功能研究奠定基础。

关键词：杜仲、几丁质酶基因(EuCHIT1)、原核表达、可溶性蛋白

所属期刊栏目：35

分类号：Q948(植物学)

资助基金：国家863计划项目2013AA102605-05;国家自然科学基金项目31360272;国家转基因生物新品种培育科技重大专项2016ZX08010003-009。

在线出版日期：2017-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：9-12