重组RNA干扰表达载体的构建与鉴定

摘要：

干扰( RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。本研究以稻纵卷叶螟可溶型海藻糖酶基因( CmTre1)为靶标,设计RNAi靶位点并将其命名为CmTre1?,在其两端分别添加BamH I与Spe I酶切位点并进行人工合成,然后经双酶切后与p1301植物表达载体连接,构建重组表达载体p1301-CmTre1?。 PCR、双酶切和测序鉴定结果证明重组表达载体p1301-CmTre1?构建成功,并将其成功转入农杆菌LBA4404,构建基因工程菌。用含有p1301-CmTre1?质粒的农杆菌LBA4404浸染中花11号水稻的愈伤组织,经过愈伤组织的抗性筛选、分化和植株再生,获得26株阳性转基因植株。用取食非转基因水稻的稻纵卷叶螟作为对照,用实时荧光定量 PCR 方法分株测定取食转基因水稻稻纵卷叶螟体内CmTre1基因的mRNA表达水平,并检测其体内海藻糖酶活性变化。结果显示,相较于对照组,取食转基因水稻稻纵卷叶螟体内CmTre1基因表达量下降了44．79%,海藻糖酶活力平均下降了14．94%。研究结果表明转基因水稻的RNA干扰效应相当明显,能对取食其叶片的稻纵卷叶螟CmTre1基因起到明显的沉默作用。

关键词：RNA干扰、稻纵卷叶螟、海藻糖酶基因、表达载体构建

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目31360443;贵州大学研究生创新基金研农2014009。

在线出版日期：2015-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：48-54