10.3969/j.issn.1008-0457.2006.01.008
七筋菇植物ISSR-PCR反应体系研究
为建立适宜于七筋菇Clintonia udensis Trautv.et Mey.ISSR-PCR分析的扩增体系,确定引物适宜的退火温度,利用正交试验设计,从Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶单位、引物浓度4种因素4个水平,对七筋菇ISSR-PCR反应体系进行优化.结果表明,根据Tm-5℃±5℃设定引物的退火温度梯度,确定出不同引物的最适退火温度.对引物873来说,其最适退火温度为53℃.按照正交试验设计,测试不同引物各因子之间在不同水平的组合情况,确定不同引物的最佳组合体系.引物897在第10组合反应最佳即3.0 mmol · L-1Mg2+;0.2mmol · L-1dNTP;0.1μL Taq DNA聚合酶; 0.2μmol · L-1引物浓度.确定10μL的反应体系中,Mg2+为2.5~3.0mmol · L-1,dNTP为0.15~0.20mmol · L-1,引物浓度为0.20~0.25μmol · L-1,Taq DNA聚合酶为0.1μL,模板DNA用量为50ng.适宜的退火温度为48~62℃.
七筋菇、简单重复间序列、正交设计、条件优化、影响因素
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Q949.718.230.3(植物学)
高等学校博士学科点专项科研项目20040697010
2006-05-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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