西尔斯山羊草(Aegilops searsii)α-醇溶蛋白编码基因的克隆及原核表达

摘要：

醇溶蛋白是小麦加工品质的重要影响因素,主要决定面团的粘性和延展性.根据酸性条件下迁移率的不同,可将醇溶蛋白分为α-,β-,γ-,ω-醇溶蛋白.α-醇溶蛋白占贮藏蛋白的15％～30％,是含量最丰富的一类贮藏蛋白,同时,α-醇溶蛋白中含有一些致敏性的毒性多肽.克隆西尔斯山羊草α-醇溶蛋白基因,并进行序列分析,通过构建原核表达载体,使其在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,并通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白.根据α-醇溶蛋白基因编码区保守序列设计引物,通过PCR扩增克隆得到α-醇溶蛋白基因并进行序列分析.将目的基因KC421089连到表达载体pEASY-E1上,在大肠杆菌BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达,获得表达的融合蛋白.通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白.从小麦近缘植物西尔斯山羊草(Aegilops searsii)中首次克隆了7个α-醇溶蛋白编码基因,它们的编码区长度分布在849～954 bp之间,可编码282～317个氨基酸.通过与已发表的其它物种的α-醇溶蛋白氨基酸序列进行多重比对分析,发现这些基因都具有α-醇溶蛋白编码基因典型的结构特点,同时还存在着碱基的缺失、插入以及SNPs.在克隆目的基因的基础上,本研究还通过大肠杆菌体外表达和切胶纯化方法,获得了纯度较高的目的蛋白,实现了该基因的表达.克隆了7个α-醇溶蛋白基因序列,登录号为KC421089的基因可在原核系统中成功表达,并通过切胶纯化法获得目的蛋白,为进一步利用西尔斯山羊草改良小麦加工品质奠定了基础.

关键词：α-醇溶蛋白、西尔斯山羊草、序列分析、原核表达

所属期刊栏目：46

分类号：S5(农作物)

资助基金：国家转基因专项“优质转基因小麦新品种培育2011ZX08002004-003

在线出版日期：2015-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：321-325