鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定

摘要：

防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主-家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素.鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景.通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株.筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达.SDSPAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa.对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例.表达上清用Ni2+-NTASepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带.琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性；和阳性菌均具有明显的抑制活性.Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础.

关键词：抗菌肽、β-防御素-1(Gal-1)、融合表达、分离纯化、亲和层析、抑菌活性

分类号：S859.79+7(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省农业科学院高技术自主创新基金2006YCX026;山东省自然科学基金ZR2009DQ018

在线出版日期：2013-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-11