DHFR基因RNA干扰质粒载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建二氢叶酸还原酶(dyhidrofolate reductase,DHFR)基因RNA干扰质粒载体,为探讨抑制DHFR基因表达在卵巢癌铂类耐药治疗中的意义奠定基础.方法:设计DHFR基因靶向的发夹状siRNA,筛选出最佳siRNA沉默片段,退火后连接入pGPU6/GFP/Neo载体,转化后进行序列鉴定,脂质体转染SKOV3细胞株,并进行荧光摄像.结果:将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGPU6/GFP/Neo载体,测序结果正确.转染SKOV3细胞后,PCR鉴定干扰效果,G418筛选稳定细胞株.结论:成功构建针对DHFR基因的siRNA载体,找到了有效的干扰靶序列,转染SKOV3细胞后,DHFR基因的表达明显减弱.

关键词：RNA干扰、二氢叶酸还原酶(DHFR)、pGPU6

所属期刊栏目：25

分类号：R73-3;R737.31(肿瘤学)

资助基金：本文课题受国家自然基金资助30960404;广西研究生创新项目资助2011105981002M178

在线出版日期：2012-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：210-214