非酒精性脂肪肝大鼠原代肝细胞的分离与鉴定

摘要：

目的 构建一种简便、稳定、高效的NAFLD大鼠原代肝细胞分离、培养方法.方法 20只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,分别饲以普通饲料和高脂饲料,10周后采用HE染色及油红O染色观察肝组织病理变化.采用含EDTA的buffer I和含0.03%IV型胶原酶的buffer II在体原位灌注肝脏,低速离心及48%percoll细胞分离、纯化肝细胞,0.4%Typan blue染色鉴定肝细胞活性,倒置相差显微镜及和CK-18免疫荧光鉴定肝细胞的形态及性质;TG测定试剂盒检测两组原代肝细胞内甘油三酯(TG)的含量.结果 HE染色及油红O染色:与对照组相比,模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显,NAFLD大鼠造模成功;NAFLD大鼠可获得肝细胞约(1~1.5)×108个/只,0.4%Typan blue染色鉴定细胞活性≥92%,细胞呈典型的肝细胞形态,CK-18表达阳性,细胞纯度≥98%;与正常组原代肝细胞相比,模型组原代肝细胞TG含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 改良的在体原位两步灌注消化法可获得大量高活性、高纯度且具备NAFLD基本代谢功能的原代肝细胞.

关键词：非酒精性脂肪肝、原代肝细胞、分离、鉴定

所属期刊栏目：38

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：四川省教育厅重点项目14ZA0144;四川省教育厅科研项目15ZB0156

在线出版日期：2017-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：21-24