NME1重组腺病毒构建及表达鉴定

摘要：

目的：应用 AdEasyTM 腺病毒载体系统构建含人 NME1基因的重组腺病毒,检测 NME1基因在肺癌细胞的表达。方法从人肝脏标本克隆带有 KpnⅠ,XhoⅠ双酶切位点的 NME1cDNA,利用细菌体内同源重组法将 NME1正向连接至腺病毒载体上,测序鉴定正确后,于 QBI-293A 细胞中包装扩增,TCID 50法检测重组腺病毒滴度,重组腺病毒转染至肺癌细胞 GLC-82,检测 NME1在细胞内表达。结果肝脏组织克隆出470bp 条带,测序与 NME1编码序列相符,测得重组腺病毒滴度为1010 TCID 50/ mL ,免疫实验显示 NME1在 GLC-82细胞成功表达。结论成功构建含人 NME1基因的重组腺病毒并转染肺癌细胞,检测到 NME1在肺癌细胞中正常表达。

关键词：NME1基因、AdeasyTM 载体系统、重组腺病毒、表达鉴定

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：四川省卫生厅科研科题100160

在线出版日期：2014-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：765-767