PCR产物与结核分支杆菌分子信标杂交优化及荧光检测的初步实验研究

摘要：

目的 建立PCR反应后再加入结核分支杆菌分子信标杂交试验,优化杂交条件.并对分子信标PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索.方法 通过对杂交温度、杂交时间以及杂交方式的优化,建立PCR反应后再加入TB分子信标杂交试验.运用荧光分光光度计和荧光显微镜对MB PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索.并进行不同荧光-淬灭分子对标记分子信标的观测试验.结果 PCR反应后再加入,TB分子信标杂交试验中水浴、PCR仪、恒温摇床的最适杂交温度和适杂时间分别为:55℃,6h;55℃,4h;50℃,7h.阴-阳性效果区分;水浴＞恒温摇床＞PCR仪.荧光分光光度仪检测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)、无游离分子信标探针PCR产物(空白对照)三者的荧光光亮度比值为:6.102/0.136/0.003.荧光显微镜观测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)荧光强度明显区别.本试验Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较Cy3-DABCLYE高,FAM-DABCLYE组成分子信标荧光.淬灭效率较FAM-BDH高.结论 建立起结核分支杆菌分子信标荧光芯片的检测技术,包括样本制备、芯片制备、杂交反应以及扫描和图像分析等方法 .并兼顾到各种因素对单侧延长臂分子信标芯片的影响,对反应体系中各条件进行了合理的优化,使所建立的检测体系稳定可靠.

关键词：分子信标、结核分支杆菌、PCR、荧光分光光度计

所属期刊栏目：30

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30571775

在线出版日期：2010-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：783-785