虹鳟fabp10基因真核表达载体构建、生物信息学及组织表达分析

摘要：

为探究虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脂肪酸结合蛋白10(fatty acid binding protein 10,fabp10)基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能等,本试验根据GenBank数据库公布的河鳟(Salmo trutta)fabp10基因的CDS序列信息设计引物,通过RT-PCR获得fabp10基因片段,将目的片段与pMD-18-T载体连接转化DH5 a感受态细胞,构建pMD-18-T-fabplo克隆载体,双酶切回收基因片段,构建pcDNA3.1fabpl0真核表达载体,分析fabp10基因在虹鳟不同组织中的表达,经双酶切、测序鉴定构建成功.将表达载体转染至EPC细胞,分别于24 h、36h、48h后收集细胞进行荧光定量PCR检测.结果显示:虹鳟fabp10基因CDS区与GenBank数据库中Salmo truttafabp10基因CDS区同源性高达100％.生物信息学分析发现,fabp10基因编码区全长378 bp,编码126个氨基酸.Fabp10蛋白主要分布在细胞质中,存在23个潜在磷酸化位点.转染pcDNA3.1fabp10可显著提高EPC细胞中fabp10 mRNA的表达(P＜0.05).RT-qPCR结果显示:fabp10基因在肝脏中表达丰度最高,随之为肾脏、肌肉、肠、脾脏、心脏,在脑中表达量最低.本试验成功扩增出fabp10基因CDS区并构建了真核表达载体,成功预测分析了其结构和功能,为研究虹鳟机体脂质代谢过程提供了基础.

关键词：虹鳟、fabp10、真核表达载体、脂质代谢

所属期刊栏目：36

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-7